Phos-tag™ Biotin ?無特異性磷酸化抗體時的好選擇

Phos-tag™ Biotin是與生物素結合的Phos-tag™，可用于免疫印跡法檢測磷酸化蛋白。Phos-tag™ Biotin BTL-104和BTL-105可靈敏檢測PVDF膜上的磷酸化蛋白。

◆原理

◆優點、特色

●??無輻射。

●??無需PVDF膜的封閉處理。

●??Phos-tag™ 的特異性結合與氨基酸種類、序列無關。

●??可適用于免疫印跡和質譜分析等后續工作。

●???Phos-tag™ BTL母液可穩定保存至少6個月。

●??實驗流程與使用HRP標記抗體相類似。

※BTL-104、BTL-105、BTL-111三者連接鏈（Linker）長度不一，但使用上基本相同。BTL-111靈敏度最高。

◆案例、應用

【使用例：在PVDF 膜上檢測磷酸化蛋白】

轉印在PVDF 膜上的磷酸化蛋白可精確檢測到ng級水平，沒有檢測到相應的去磷酸化蛋白與非磷酸化蛋白的信號斑點。

免疫印跡檢測磷酸化蛋白——Phos-tag ™ 生物素。

摘自Eiji Kinoshita ,et al., Mol.Cel.Proteomics (2006) 5: 749

【使用例：Phos-tag™ 生物素在檢測蛋白激酶活性的微陣列（生物芯片）中的運用】

蛋白激酶是很多疾病診斷和藥物篩選的靶標。近來有科研人員研發了一種檢測胞內蛋白激酶活性的高靈敏度多肽微陣列。用微陣列點樣機點樣2nL體積的底物多肽溶液，使多肽固定在戊二醛預修飾的高氨基末端載玻片。

當多肽經細胞裂解液磷酸化后，用熒光標記的抗phosphotyrosine（磷酸化酪氨酸）抗體檢測酪氨酸激酶，或者用Phos-tag™ 生物素，接著用熒光標記的親和素檢測絲氨酸或者蘇氨酸激酶。之后用自動微陣列掃描儀檢測熒光信號。多肽微陣列系統包括簡單的多肽固定，只需少量樣品，具有高密度陣列。重要的是，檢測細胞裂解液蛋白激酶活性的靈敏度高。

因此多肽微陣列系統可用于高通量篩選細胞內激酶活性，可用于藥物篩選和疾病診斷。